Motivet är Jesu sista måltid som den beskrivs i Johannesevangelietdå han instiftade nattvarden. Verket brukar betraktas som ett av de första som skapades i enlighet med högrenässansmåleriets ideal. Muralmålningen är skapad på torr putsdet vill säga al secco vilket tillät Leonardo att arbeta över hela kompositionen samtidigt istället för att tvingas avsluta en del av väggen åt gången, vilket är nödvändigt när man uppför en freskmålning på våt puts, det vill säga al fresco.
Utöver detta experimenterade han med ett slags oljetempera. År restaurerades Nattvarden till en kostnad av 40 miljoner kronor. Kompositionen följer ett antal skisser som Leonardo utförde i Florens en kort tid innan han påbörjade Nattvarden.
Gestalterna i målningen är insatta i ett bildrum som utvidgar det faktiska klosterrummet, refektorietdär den är målad. Istället för att återge lärjungarna i en odifferentierad rad, vilket ofta varit brukligt i liknande avbildningar, samlade han dem i grupper om tre och åstadkom ett nätverk av formella och känslomässiga kontakter, som binder varje gestalt till sina grannar och till Kristus i mitten.
Genom att välja det ödesmättade ögonblick i evangelieberättelserna då lärjungarna frågar Kristus vem av dem, som skulle förråda honom — Det är väl inte jag, Herre? Till skillnad från andra tidigare talsmålningar på samma tema har han rensat bilden, inte bara från många vidlyftiga detaljer, utan även från symboler den sista nattvarden kändisar inskriptionersom brukade användas för att identifiera de olika personerna.
Exempelvis saknar de glorior för att ange deras helighet, även om Kristi gudomliga nimbus antyds av det naturliga ljuset från fönstret, som inramar hans huvud, medan Judas huvud befinner sig i skugga. Denna ordning på lärjungarna fann man på talet nedskriven i ett manuskript av Leonardo.
Bland annat menar Brown i boken att lärjungen som sitter till vänster om Jesus inte är Johannes utan Maria Magdalena. Denna idé hämtade Brown från den pseudohistoriska boken The Templar Revelation Han skrev också att det är med en hand med en dolk och att den handen inte hör till någon person; det syns mellan Judas och Petrus.
En replik av Nattvardenmålad med olja på duk, från talet finns bevarad i klostret i Tongerloo i närheten av Antwerpen i Belgien. Denna målning uppvisar många detaljer som inte längre är synliga på originalet. Verket har ofta parafraserats.
I Önsta Gryta kyrka i Önsta församling i Västerås har barn och ungdomar i församlingen byggt en av världens största pärlplattor med Nattvarden som förlaga. Den består av pärlor. Parodier på målningen förekommer i ett antal filmer.
I Turtlesavsnittet "Artless" från års serie, är målningen ett av flera renässanskonstverk som blir stulna den sista nattvarden kändisar utomjordingar. Parafraser och parodier på målningen har också använts i många [ vilka?
För andra betydelser, se Nattvarden olika betydelser. Läst 27 november Arkiverad från originalet den 28 november